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        免疫印跡實驗操作指南

        該免疫印跡實驗方法僅供參考,由于每個實驗使用的試劑不同,并且涉及不同的物種,組織類型及實驗應用,實驗人員設計應根據具體情況設計實驗步驟和改良。

        阻斷

        1. 使用 5% 脫脂奶粉溶于 1X TBST 作為阻斷緩沖液.

        2. 使用足夠多的阻斷緩沖液確保凝膠被完全覆蓋.

        3. 室溫下阻斷并震蕩1小時.

         

        沖洗

        1. 1X TBST 中沖洗3次,每次4分鐘,然后1X TBS中沖洗 3次,每次4分鐘.

        2. 確保在盒子里一直都有足夠的沖洗緩沖液.

         

        一抗孵育

        1. 將一抗在 TBST中稀釋.

        2. 室溫下震蕩孵育 2 小時.

        3. 時而檢查凝膠確認其完全被抗體溶液覆蓋.

         

        沖洗

        1. 1X TBST 中沖洗3次,每次4分鐘,然后1X TBS中沖洗 3次,每次4分鐘.

        2. 確保在盒子里一直都有足夠的沖洗緩沖液.

         

        二抗孵育

        1. 在1X TBST (濃度根據使用的抗體而定) 中制備二抗.

        2. 室溫下震蕩孵育 1 小時.

        3. 時而檢查凝膠確認其完全被抗體溶液覆蓋.

         

        沖洗

        1. 1X TBST 中沖洗3次,每次4分鐘,然后1X TBS中沖洗 3次,每次4分鐘.

        2. 確保在盒子里一直都有足夠的沖洗緩沖液.

         

        檢測

        ECL檢測試劑的用量取決于凝膠的大小. 通常來說, 用量需要足夠完全覆蓋凝膠.

        1. 1:1 混合溶液 A 和溶液 B.

        2. 用鑷子夾起凝膠,輕輕拍在無塵擦紙上,去除凝膠上多余的 Tris.

        3. 把凝膠放在新的干凈的盒子里,加入檢測試劑,確保凝膠均勻的被覆蓋.

        4. 在黑暗中孵育凝膠 5 分鐘.

        5. 用鑷子夾起凝膠,用無塵擦紙洗掉多余的試劑.

        6. 凝膠成像.


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